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堿性磷酸酶染色液

點擊次數(shù)：4603　日期：2019/6/12 14:38:34

堿性磷酸酶染色液

產(chǎn)品簡介：

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下細胞內(nèi)堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細胞質(zhì)中，該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍色，位于胞槳，結果較金屬鹽沉淀法可靠。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品		3*10ml	3*20ml	Storage
試劑(A):ALP固定液		100ml	20ml	RT 避光
試劑(B): ALP 孵育液	B1:AS-BI染色液	3*2ml	5*2ml	-20℃避光
試劑(B): ALP 孵育液	B2:FBB染色液	5ml	10ml	4℃避光
臨用前，按 B1:B2=1:1 比例混合，即為 ALP 孵育液，即配即用。
試劑(C):核固紅染色液		10ml	20ml	4℃避光
使用說明書	1份

自備材料：

1、載玻片、濕盒

2、顯微鏡

3、4%多聚甲醛固定液(備選)

操作步驟(僅供參考)：

1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定)，水洗。

2、滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中避光孵育15～20min，水洗。

3、入核固紅染色液復染 3～5min。

4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。

(二) 貼壁培養(yǎng)細胞

1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細胞，棄液，PBS清洗干凈。

2、加4%多聚甲醛固定10～20min，PBS 清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中避光孵育15～20min，PBS清洗。

4、入核固紅染色液復染0.5～3min。

5、PBS 清洗、鏡檢。

染色結果：

ALP 活性部位	藍色
細胞核	紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)

血液、骨髓涂片結果判斷：

一般以積分報告結果，根據(jù)100個中性粒細胞陽性顆粒進行 0～4+計分。

細胞分值	染色特點
0	無顆粒
1	稍有顆粒
2	中等程度顆粒
3	多數(shù)顆粒
4	充滿顆粒

臨床意義：

1、類白血病反應積分明顯增高，未經(jīng)治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。

2、急性細菌性感染積分明顯增高，病毒性感染積分多正常或減低。

3、再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS 積分常減低。

注意事項：

1、AS-BI 染色液易失效，應避免反復凍融，臨用前低溫緩慢溶解，不可用溫水或熱水助溶。

2、ALP 孵育液易失效或降低陽性強度，即配即用，不宜久置。

3、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。

4、培養(yǎng)細胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應輕微，以免損傷或丟失細胞。

5、培養(yǎng)細胞或細胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液，ALP 固定液更適用于血液或骨

髓細胞圖片的固定，染色時間應根據(jù)具體細胞特性而異。

有效期：12個月有效。

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司

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