影響ELISA實(shí)驗(yàn)的部分因素

     目前，病毒性疾病的診斷主要依賴對其抗原或是抗體的檢測，國內(nèi)使用zui多的就是酶聯(lián)免疫吸附法實(shí)驗(yàn)，酶免實(shí)驗(yàn)靈敏度較高。但是如何保證結(jié)果的，結(jié)合實(shí)驗(yàn)人員實(shí)際操作，對影響酶免檢測結(jié)果的因素粗略的分析一下。

一 試劑盒的選擇

   時(shí)機(jī)和質(zhì)量直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前國內(nèi)試劑盒與國外的質(zhì)量相差不大，94年起國家對體外診斷試劑統(tǒng)一實(shí)行批批檢測。我們的經(jīng)驗(yàn)是根據(jù)同行對試劑盒的使用滿意度，部分根據(jù)衛(wèi)生部檢測中心對參加室間質(zhì)評實(shí)驗(yàn)室的試劑盒使用情況綜合評價(jià)。

通常試劑盒的效期是根據(jù)酶結(jié)合物的穩(wěn)定性確定。這是試劑的核心組份，要防止反復(fù)的劇烈溫差變化，取用時(shí)的原則“即取即用”減少酶的失活，或者直接采購小包裝的試劑盒。

二標(biāo)本

標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性，目前實(shí)驗(yàn)室zui常用的標(biāo)本為血清。首先家養(yǎng)一定要在血塊完全收縮分離后進(jìn)行，否則纖維蛋白容易吸附孔底導(dǎo)致假陽性結(jié)果。溶血對酶免實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會(huì)有較大影響。在標(biāo)本采集時(shí)用玻璃試管采集，有報(bào)道塑料試管存放，進(jìn)行乙肝兩對半檢測。結(jié)果4H后明顯偏低，這是因?yàn)榫垡蚁┯形�附抗原或抗體蛋白，但是目前大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)室免疫項(xiàng)目并非每天都做，比如乙肝兩對半抗HCV等。

三 加樣稀釋

   我國大多數(shù)抗HCV等試驗(yàn)標(biāo)本只有10μl  10%的誤差。以2μl/L HBsAg質(zhì)控血清進(jìn)行試驗(yàn)，加量分別為50μl 45μl，其余條件一致，測定結(jié)果吸光度分別為0.405±0.026和0.288±0.047.因此，移液器的準(zhǔn)確性需要進(jìn)行校驗(yàn)。zui好使用進(jìn)口移液器，同時(shí)移液器，移液器要與吸頭連接緊密。

   關(guān)于稀釋劑，媒介和物的家主，國內(nèi)也有部分使用滴瓶滴加，但是加液兩不夠準(zhǔn)確會(huì)造成稀釋倍數(shù)的差距。建議使用移液器加注。

四 育溫

通常在37度的水浴箱中完成，水浴箱的溫度指示為水的溫度，不過要值得注意的是不能將反應(yīng)板放在試管架上，要是反應(yīng)板飄浮在水面上稍高出試管架，箱蓋不能時(shí)常打開，保持箱內(nèi)的溫度恒定，相反的情況容易假陽性結(jié)果。

五洗版

   zui好選擇手動(dòng)洗版，手工法洗版每洗一次在吸水紙上拍干一般都能保證洗版效果。

六顯色

   國內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑盒的色源底一般分為AB兩種液體。由于兩種液體不穩(wěn)定，使用保存不當(dāng)容易產(chǎn)生顏色，發(fā)現(xiàn)有顏色必須丟棄，顯色時(shí)加入A液后加B液。過程按照說明書嚴(yán)格執(zhí)行。否則隨著時(shí)間的延長吸光度會(huì)下降出現(xiàn)假陽性發(fā)生。

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