高效液相色譜和古典液相色譜的比較
高效夜宵液相色譜法時1964年-1965年開始發展起來的一項新穎快速的分離分析技術。它是經典液相色譜法的基礎上,引入氣相色譜的理論,在技術上采用了高壓、高效固定相和高靈敏度的檢測器,使之發展成為高分離速度、高分辨率、高效率、高檢測靈敏度的液相色譜法,也稱為現代液相色譜法。
古典液相色譜的致命弱點是柱效低、分離時間長,難以解決復雜混合物的分離,與氣相色譜比較有很大的差距。從色譜的速率林論知道,要提高柱效,就要把固定相的顆粒減小,同時要加快傳遞的速率:要縮短時間就要把流動相的速度加快。因此要客服古典液相色譜的缺點,就必須針對這些問題進行研究。采取的措施就是要研制出粒度小,傳質縮率塊的固定相;使液相色譜柱達到柱效高、分析時間短、靈敏度高的效果。下圖為兩種方法的比較:
HPLC月GC的比較
HPLC是在GC告訴發展的情況下發展起來的。他們之間的理論上和技術上有許多共同點,主要有1色譜的基本理論是一致的2 定性定量原理完全一樣3均可應用計算機控制色譜操作條件和商鋪數據的處理程序,自動化程度較高。
由于HPLC的流動相是液體,二液體的粘度比氣體大100倍以上,擴散系數比氣體小,故溶質分子與液體流動相之間的作用力不能忽略,致使HPLC與GC有一下差別
流動想差別:
GC用氣體做流動相,氣體與樣子分子之間作用力可忽略,而且,載氣種類少,性質接近,改變載氣對柱效和分離效率影響小,HPLC以液體做流動相,液體分子與樣品分子之間的作用力不能忽略。而且液體種類多,性質差別大,既可以是水溶液,又可以時有機溶劑;既可以是極性化合物,又可以時非極性化合物,可供選擇范圍廣,是控制柱效和分離效率的中藥因素之一,使HPLC除了固定相的選擇外,增加了一個可供選擇的中藥的操作參數。
固定相差別
GC固定相多事固體吸附劑和擔體表面涂漬一層高沸點有機液體組成的液體固定相及今年出現的一些化學鍵合組。GC古興祥粒度粗(一般為100-250um)、吸附等問線多事非線性的,但成本低。HPLC固定相大都是新型的固體吸附劑,化學鍵合相等,力度。ㄒ话銥3-10um),分配等溫線多事線性的,峰形對稱,但成本高。樣品容量比GC高,分析型色譜柱最大容量可達50mg以上。
使用范圍更廣
GC一般分析沸點500℃以上,相對分子質量少于450的物質,而對熱穩定性差,易于分解,變質及具有生理活性的物質,都不能用升溫氣化的方法分析。因此GC只能分析占有機物總數15-20%的物質
HPLC在溫室或接近室溫條件下工作,可分析沸點在500℃以上,相對分子質量在450以上的有機物質。這些有機物質占總數的80-85%。HPLC的使用范圍遠遠超過GC。
原理和結構差別
高效液相色譜儀和氣象色譜儀在原理和結構上亦有很大差別。高效液相色譜儀具有高壓輸液系統,其檢測器的檢測原理和機構與GC有較大差異。
應指出,高效液相色譜和氣相色譜各有所長,互相補充。在HPLC越來越廣泛地獲得應用的同時,GC仍然返回這他的重要作用。
原創作者:青島捷世康生物科技有限公司