蛋白質含量的測定——紫外（uv）吸收測定法
目的要求
1、了解紫外吸收法測定蛋白質含量的原理。
2、掌握紫外分光光度計的使用方法。
實驗原理
蛋白質分子中所含酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，使蛋白質在280nm波長處有最大吸收值。在一定濃度范圍內，蛋白質溶液的光吸收值（A280）與其含量成正比關系，可用作定量測定。
紫外線吸收法測定蛋白質含量的優點是迅速，簡便，不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，廣泛應用在柱層析分離中蛋白質洗脫情況的檢測。此法的缺點是：1、對于測定的那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質，有一定的誤差；2、若樣品中核酸等吸收紫外線的物質，會出現較大的干擾。
不同的蛋白質和核酸的紫外線吸收是不同的，即使經過校正，測定結果也還存在一定的誤差。但是可作為初步定量的依據。該法可測定蛋白范圍應在0.1～1.0mg/mL。
試劑和器材
1、標準和待測蛋白質溶液
（1）、標準蛋白溶液。結晶牛血清蛋白，預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據其純度配制成1mg/ml蛋白溶液。
（2）、待測蛋白質溶液。人血清，使用前稀釋100倍。
2、器材
試管1.5cm×15cm（×9），試管架，移液管1mL（×3）；2mL（×2）；5mL（×2）；分光光度計。
操作方法
1、制作標準曲線
取8支試管編號，分別向每支試管加入各種試劑，搖勻。選用光程為1cm的石英比色杯，在280nm波長處分別測定各管溶液的A280值。以A280值為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
2、樣品測定
取待測蛋白質溶液1mL，加入蒸餾水3mL搖勻，按上述方法在280nm波長處測定光吸收值，并從標準曲線上查出待測蛋白質的濃度。
注意事項
由于各種蛋白質含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，顯色的深淺往往隨不同的蛋白質而變化。因而本測定法通常只適用于測定蛋白質的相對濃度（相對于標準蛋白質）。此外，蛋白溶液中存在核酸或核苷酸時也會影響紫外吸收法測定蛋白質含量的準確性。
原創作者：青島捷世康生物科技有限公司
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