ELISA試驗中常見問題原因分析
一、ELISA試驗中結(jié)果顯色淡、靈敏度品低的原因。
1、移液的樣品吸量不足，移液時抽吸、排放太快，移液嘴內(nèi)壁掛液太多貨內(nèi)壁不清潔，造成加樣量不準。
2、恒溫箱溫度不是37℃（或43℃），或多塊反應(yīng)板重疊放置造成板孔內(nèi)的實際溫度偏差，使抗原、抗體復合物形成過少。
3、保溫時間不足，抗原、抗體反應(yīng)不完全
4、顯色劑加入量不足。
5、顯色液的A、B液比例不對。、
6、洗滌時沖擊力過大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數(shù)增加，導致已形成的抗原、抗體復合物洗脫。
7、底物反應(yīng)的溫度不夠，時間不足。
8、試劑盒在運輸、保存期間放置的溫度太高、時間過長，造成抗原、抗體效價下降，酶的活力降低。
9、試劑盒已超出保存有效期，抗原、抗體效價下降，酶活力降低。
二、ELISA試驗中結(jié)果出現(xiàn)白板、陽性對照不顯色的原因
1、洗滌液配制有誤。
2、終止液誤作為濃縮洗滌液或酶結(jié)合物稀釋液使用。
3、漏加酶結(jié)合物，物價酶結(jié)合物或在酶標二抗的試驗中實驗順序錯誤。
4、終止液當做底物緩沖液使用
5、配制溶液中殘留了解滅火酶活力的物質(zhì)。
6、底物中未加OPD或TMB。
7、運輸、貯存不當，導致沒活力喪失。
8、底物液中未加過氧化氫或放置過久過氧化氫失效。
三、而莉薩是嚴重結(jié)果全部顯色的原因
1、酶結(jié)合物的濃度過大
2、恒溫箱溫度較高，酶結(jié)合物光片時間或底物顯色時間過長。
3、洗滌不充分，樣品中有其他成分殘留或酶結(jié)合物殘留。
4、底物配置時間過久，底物受光照射時間較長或被污染。
5、整批樣品放置時間過長被污染或生長細菌。
6、一夜醉從復使用時，未清洗干凈或消毒不徹底
7、配制溶液的水質(zhì)有問題。
四、ELISA試驗中結(jié)果陰、樣對照顯色差距較小的原因
1、稀釋不準。加樣量不準。
2、加樣時個空軍被污染
3、底物不新鮮，配制時間較長或被污染。
4、試劑效價下降或超過了試劑的有效使用期。
5、配制溶液的水質(zhì)有問題
五、ELISA試驗中結(jié)果重復性不好的原因
1、樣品加入量多少不一，加樣時間又長又短。
2、樣品加入后為充分混合均勻。
3、移液加樣器加樣量不一致。
4、酶標儀濾光片不對。
5、操作過程中個別反應(yīng)孔中液體外濺。
6、不同批號試劑混用。
7、瓶蓋交叉使用
8、溫育條件和保溫時間不一致。
9、洗滌條件不一致。
10、顯色條件和時間不一致。
11、邊緣效應(yīng)，導致周邊孔（尤為4個較）較中央孔顯色為深。
12、將酶結(jié)合物或底物溶液加載了孔壁上，并有殘留。
13、酶結(jié)合物充分混勻就加入反應(yīng)孔中。
14、多加或少加了酶結(jié)合物、底物。
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