四虎影在线永久免费观看-四虎影院最新网址-四虎影院最新网站-四虎影院最新入口-四虎影院最新地址-四虎影院中文字幕

捷世康生物是一家專注于生命科學和生物技術領域的“新星”企業,產品及代理品牌產品范圍涵蓋了分子生物學細胞生物學免疫學生物化學等生命科學相關領域及相關實驗室消耗品

品牌中心

熱賣產品

企業動態

小牛胸腺DNA的制備——濃鹽法

點擊次數:1138 日期:2016/6/20 8:53:53

小牛胸腺DNA的制備——濃鹽法
目的要求
了解從動物組織中提取基因組DNA的方法。
實驗原理
    DNA在生物體內是以與蛋白質形成復合物的形式存在的,因此提取出脫氧核糖核酸蛋白復合物(DNP)后,必須將其中的蛋白質除去。小牛胸腺,魚類精子和植物種子的胚等含有豐富的DNA,可作為提取DNA的良好材料。動物和植物組織的脫氧核糖核蛋白可溶于水或濃鹽溶液,但在0.14mol/L鹽溶液中的溶解度很低,而核糖核蛋白則溶于0.14mol/L鹽溶液中,利用這一性質可將脫氧核糖核蛋白與核糖核蛋白以及其他雜質分開,當核蛋白與氯仿一起振蕩時,蛋白質變性而與核酸分開,核酸繼續保留于水相中,再用乙醇將水相中的DNA沉淀出來。
  為除去DNA制品混雜的RNA,可用核糖核酸酶處理。大部分多糖在用乙醇或異丙醇分級沉淀時即被除去,如需要還可以進一步通過柱層析或電泳加以純化。
試劑和器材
1)、試劑
0.1mol/L氯化鈉—0.05mol/L、pH7.0檸檬酸鈉緩沖液;先配制0.05mol/L,pH—7.0檸檬酸鈉緩沖液,然后將氯化鈉溶于此緩沖溶液中,使其最終濃度達到0.1mol/L。
 10%氯化鈉溶液;氯仿異戊醇混合液;95%乙醇,無水乙醇。
2)、材料
小牛胸腺
3)、器材
組織搗碎機、離心機、玻璃勻漿器。
操作方法
1、取新鮮的小牛胸腺,除去血水和結締組織,在水浴上切成小塊,稱取20g,加入2倍體積的0.1mol/L氯化鈉—0.05mol/L,pH=7.0檸檬酸鈉緩沖溶液,于組織搗碎機上高速勻漿5min。
2、組織糜用轉速為3000r/min的離心機離心15min,將沉淀用50mL上述緩沖溶液洗滌2次,洗滌時用勻漿器研磨洗滌,每次如前離心。
3、向最后得到的細胞核沉淀中加入6倍體積的10%氯化鈉溶液,充分攪勻置冰箱中過夜,以充分提取DNP,溶液為黏稠狀。
4、將所得的半透明黏稠狀液體,用滴管慢慢注入冷蒸餾水中,邊加邊輕輕攪動,這時有白色絲狀物——核蛋白析出,在冰箱中靜置數小時,收集沉淀。將沉淀物再溶于4倍體積的10%氯化鈉溶液中,迅速攪拌以加速溶解。
5、加入1/2體積的氯仿異戊醇混合液,劇烈振蕩5min左右,用轉速為3000r/min的離心機離心15min,得三層:上層為含有DNA和DNA核蛋白的水層,下層為氯仿異戊醇的有機溶劑層,變性蛋白質介于兩層之間。
6、吸出上面的水層,再用氯仿異戊醇如前進行脫蛋白,直至界面處不再出現變性蛋白質為止。
7、最后吸出上清液并將其注入兩倍體積的95%乙醇中,用玻璃棒攪起白色纖維狀DNA沉淀,瀝干,用80%乙醇洗滌,最后用少量無水乙醇洗滌。盡量瀝干乙醇后,鋪開在表面皿上。置于真空干燥器內干燥,既得白色纖維DNA鈉鹽。
注意事項
(1)、由于DNA主要存在于細胞核中,為了便于提取DNA,應嚴格控制胸腺破碎的條件,既要將細胞膜破碎,又要盡可能避免細胞核被破壞,導致DNA釋放而被斷裂。
(2)、在用氯仿異戊醇除去組織蛋白時,要劇烈振蕩使蛋白變性。若振蕩不夠,蛋白質不能很好除去,則影響DNA制品的質量。

掃一掃,關注手機網站!!!

收縮
  • 電話咨詢

  • 4009025885
請掃一掃!
主站蜘蛛池模板: 国产精品高清在线| 四虎永久免费地址| 成人欧美视频在线看免费| 欧美日韩精品一区二区三区视频| 好吊色视频988gao在线观看| 亚洲黄色高清| 亚洲欧美日韩在线观看看另类| 99精品视频在线观看免费| 日本性生活免费看| 欧美在线视频一区| 久久精品99国产精品日本| 久久精选视频| 欧美一级专区免费大片俄罗斯| 亚洲品质水蜜桃| 成人a级特黄毛片| 久久久精品成人免费看| 9久热久爱免费精品视频在线观看 9久re热视频这里只有精品 | 亚洲 欧美 国产 综合首页| 日女人免费视频| 美女张开大腿让男人桶| xxxxx性欧美| 99精品国产高清自在线看超| 暖暖的免费观看高清视频韩国| 国产99精品免费视频看6| 久99视频精品免费观看福利| 亚洲欧美日韩中文字幕久久| 日本艳鉧动漫1~6在线观看| 免费观看大片毛片| 成人福利在线播放| h网站国产| 国产nv精品你懂得| 色婷婷综合久久久中文字幕| 女同志 videos| 免费一级毛片在级播放| 国产亚洲毛片在线| 国产精品色片| 插入逼| 美女啪啪国产| 日本欧美强乱视频在线| 香蕉91xj.cc| 日本javhd|