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土壤脫氫酶試劑盒說明書

點擊次數:1172 日期:2016/9/7 8:35:56

土壤脫氫酶 Soil dehydrogenase, sDHA  試劑盒說明書
 
(分光光度法 50T/24S)
 
測定意義
 
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內活性微生物 以及其對有機物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標
 
測定原理
 
氫 體 2, 3, 5 -  化 苯 四 唑 2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC  在細胞呼吸
 
過程中接 氫以后,被還原為 苯 甲鐟 Triphenyl Formazone, TF ,TF 呈現紅色,在波長 485nm 處有最大吸收峰,采用分光光度法于 485nm 測定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性
 
自備實驗儀器及用品
 
篩子 天恒溫 養箱或水浴鍋溫離心機 可見分光光度玻璃比色皿,冰 蒸餾
 
水 丙酮允許快遞,請用戶自備
 
試劑的組成和配制
 
試劑一:粉劑×1 瓶,使用前加 30mL 水溶解,4℃避光保存 盡 現配現用試劑 :液體 50mL×1 瓶,4℃保存試劑 :丙酮,自備
 
 
樣品處理
1、土壤樣品:準確稱取過40目篩的新鮮土壤樣品約0.1g(以保證TTC與土壤顆粒充分接觸)。
2、污泥樣品:污泥用蒸餾水洗滌,12000rpm,25℃,離心10min,棄上清,反復3-4次。
測定步驟和操作表
                         對照管              測定管
樣品(g)                 0.1                  0.1
試劑一(mL)                                   0.5
試劑二(mL)               1                    0.5
充分混勻,37℃,暗培養6h,取出后立即水浴5min
試劑三(mL)               0.5                  0.5
反復振蕩數次,37℃保溫10min,12000rpm,4℃,離心5min,取上清1mL于1mL玻璃比色皿,對照管調零,測定A485.
脫氫酶活力計算
 酶活單位定義:在37℃時,每克樣品每小時使反應體系OD值每增加0.01為一個酶活單位。
計算公式:SDHA活性(U/g)=A485/0.01÷培養時間(h)÷樣品質量(g)=16.67×A485÷樣品質量(g)
注意事項
 
1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃,最好在一周內使用,若出現紅色,則 能使用
 
2. 試劑 易揮發,有毒,為了您的健康,請穿實驗服,戴口罩,戴乳膠手套操作
 
3. 反應完成后立即冰浴以終止反應,并去除 凈殘留的反應液
 
4. 如果測定出來的吸光值較大, 少樣品用 再進行測定
 
5. 試劑盒 2-8℃保存

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