過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒

貨號: H0090
規格: 50T/48S

過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒方法：紫外分光光度法

注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

產品內容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體100μL×3瓶，4℃保存。

產品說明：

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是最主要的 H₂O₂ 清除酶，在活性氧清除系統中具有重要作用。

H₂O₂在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H₂O₂，使反應溶液240nm下的吸光度隨反應時間而下降，根據吸光度的變化率可計算出CAT 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：

紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒操作步驟：

一、粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備

細菌或培養細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個）：提取液體積（ml）為500-1000:1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（功率20%或 200w，超聲3秒，間隔10秒。重復30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積（ml）為 1：5-10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、CAT 測定操作

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長至240nm處，蒸餾水調零。

2、 CAT檢測工作液的配置：用時在每瓶試劑二（100μL）中加入20ml試劑一，充分混勻，作為工作液；用不完的試劑4℃保存一周。

3、 測定前將CAT檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴10min。

4、 取 1mL CAT 檢測工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL樣本，混勻 5s；室溫下立即測定 240nm

下的初始吸光值 A1和1min后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2

三、過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒活性計算：

1、 血清（漿）CAT活力的計算：

單位的定義：每毫升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化1nmol H₂O₂ 降解定義為一個酶活力單位。

CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷V 樣÷T=678×ΔA

2、 組織、細菌或細胞中CAT活力計算：

a. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化1nmol H₂O₂ 降解定義為一個酶活力單位。

CAT（U/mg prot）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷（V樣×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr

b. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化1nmol H₂O₂ 降解定義為一個酶活力單位。

CAT（U/g鮮重）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=678×ΔA÷W

3、 按細菌或細胞中CAT活力計算：

單位的定義：每 1萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H₂O₂ 降解定義為一個酶活力單位。

CAT（U/10⁴cell）＝﹝ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹﹞÷（500×V 樣÷V樣總）÷T=1.356×ΔA

V 反總：反應體系總體積，1.035×10^-3L；ε: H₂O₂ 摩爾吸光系數，4.36×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.035ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1min。W，樣本質量，g；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數，500萬

原創作者：青島捷世康生物科技有限公司

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